George
George Milton. Es un trabajador de campo migrante que viaja de granja a granja con su amigo mentalmente discapacitado durante La Gran Depresión de Estados Unidos. Los dos hombres sueñan con juntar el dinero necesario para comprar una pequeña granja donde Lennie pueda criar conejos. Gracias a su superioridad mental, George asume un papel dominante hacía con Lennie, actuando como su padre. Debido a que Lennie tiende a meter a George en problemas difíciles, George tiene que ser responsable y estar listo para lidiar con cualquier tragedia que pueda suceder. A pesar de los muchos problemas que Lennie le causa a George, él decide quedarse con su amigo para luchar contra la soledad y él realmente espera que algún día los dos puedan dejar atrás la vida incierta de trabajadores migrantes y vivir una existencia más gratificante.
Lennie
Lennie Small. Lennie es un gigante hombre mentalmente discapacitado que es dócil y simple. Está obsesionado con simples placeres sensoriales, particularmente encuentra gran dicha en tocar cosas suaves, ya sea un vestido de algodón o a un cachorrito. Aunque Lennie es inocente por naturaleza, él es capaz de ser muy violento debido a que no tiene la capacidad de controlarse físicamente y tiene un gran instinto protector cuando tiene que ver con su mejor amigo, George. Al igual que George, Lennie sueña con tener su propia granja; él está obsesionado con un aspecto particular de este sueño: tener una pequeña conejera donde él pueda criar conejos. Lennie es incapaz de tomar decisiones propias y depende completamente de George.
Candy
Un viejo hombre lisiado que ha perdido su mano, Candy es el cuidador del rancho. Él se mantiene unido a sus perro viejo, el cual se vuelto tan débil y enfermo que depende completamente de Candy para sobrevivir. Aun así, cuando Carlson se queja del mal olor del perro, Candy le permite a Carlson sacrificar al animal para librarlo de su miseria. Candy es un hombre pasivo e incapaz de tomar alguna acción independientemente. En efecto, su más grande contribución a la novela es cuando les ofrece dinero a George y a Lennie para poder comprar un pedazo de tierra junto con ellos– y de esta forma poder depender de ellos.
Curley
Es el hijo del dueño del rancho. Es un hombre de baja estatura pero aun así es un formidable boxeador. Curley es agresivo, presuntuoso y arrogante, con un temperamento inestable y una tendencia a provocar problemas con los débiles, como suele hacer con Lennie. Parte de la actitud bravucona de Curley se debe a su nueva esposa, a quien todos consideran ser una buscona. Curley pasa gran parte del tiempo monitoreando a su esposa, y cree que esta esta con otros hombres cuando no está bajo su supervisión.
La mujer de Curley
Generalmente los hombres del rancho la consideran una cualquiera. La mujer de Curley es el único personaje principal de la novela a quien Steinbeck no le da un nombre. A ella no le agrada su esposo y se siente sola en el rancho ya que es la única mujer y se siente rechazada por los otros hombres, quienes abiertamente la menosprecian. Ella aún tiene poca esperanza por una vida mejor, y asegura que tuvo la oportunidad de convertirse en una estrella de Hollywood, pero aun así es una mujer resentida y despreciable que utiliza el sexo para intimidar a los trabajadores. Lennie accidentalmente la asesina.
Crooks
El peón del establo del rancho. Crooks es el único hombre de raza negra en la novela. Es un hombre orgulloso y amargado que usa su inteligencia cínica y su carácter desdeñoso para evitar que los otros lo excluyan inevitablemente por su raza. Su carácter defensivo se esfuma una vez que Lennie se porta amablemente con él, y Crooks hasta considera ayudar a Lennie y a Candy con su plan de comprar un pedazo de tierra, todo esto antes de que las amenazas de la esposa de Curley lo llevan de vuelta a tomar su postura agresiva.
Carlson
Un grande hombre panzón que trabaja en el rancho. Carlson se queja del olor del perro de Candy y eventualmente se ofrece a sacrificar el animal para librarlo de su sufrimiento. George roba la pistola de Carlson para dispararle a Lennie después de que este asesina a la esposa de Curley accidentalmente.
Slim
El mulero del rancho. Slim es un hombre que no parece envejecer y se porta con mucha seriedad. Slim le regala a Lennie uno de sus nuevos cachorritos para que este lo cuide. Curley inicialmente sospecha que su esposa le es infiel con Slim.
Whit
Es uno de los trabajadores del rancho. Whit es un hombre joven quien le muestra a Carlson la revista con la carta de William Tenner.
El jefe
El jefe del rancho quien también es el padre de Curley. Este siente desconfianza de George y Lennie cuando estos llegan a el rancho porque cree que hay algo raro en el compañerismo de dos hombres tan diferentes.
Tía Clara
La mujer que crió a Lennie. Aunque esta ya murió, se le aparece a Lennie en alucinaciones cuando este se esconde en un arbusto en el capítulo Seis de la novela. En esta alucinación, ella parece una mujer pequeña pero robusta que regaña a Lennie por su estupidez.
William Tenner
Un antiguo trabajador del rancho que manejaba una cosechadora. Whit le muestra a Carlson una revista que contiene una carta al editor que Bill Tenner escribió.
Andy Cushman
Un conocido de George de la primaria. George le comenta a Lennie que Andy esta en la cárcel de San Quentin gracias a una 'cualquiera'
Al Whits
El jefe de la policía de Soledad. Curley manda a Whit a buscarlo cuando su esposa es asesinada.
