Sherlock Holmes
Es el protagonista de la novela. Es un famoso detective que vive en Londres en el 221b de Baker Street, y es sumamente inteligente, metódico, analítico, frío, observador y reservado. Aunque en esta historia pasa un poco desapercibido por el protagonismo que adquiere el personaje de Watson, sentimos siempre su presencia, especialmente a la hora de resolver el misterioso caso de los Baskerville. Para lograrlo, son necesarios sus extraordinarios poderes deductivos.
John Watson
Es el otro protagonista y el narrador de la novela. A pesar de su formación como médico, en la novela es el compañero y complemento de Holmes. Además, también tiene un rol esencial durante varios capítulos como detective. Es un hombre observador y sensato, pero carece de la capacidad de análisis e imaginación de Holmes. Sin embargo, se muestra ansioso por complacerlo e impresionarlo, colaborando en este desconcertante caso. Suele ser más cálido y empático frente a los sentimientos de los demás que Holmes. En esta historia, sus ojos y oídos son fundamentales para reunir pistas para su maestro.
Sir Henry Baskerville
Es el sobrino del difunto sir Charles Baskerville, y el heredero de los bienes y la fortuna de la familia. Es un hombre audaz, robusto y práctico; aunque también impaciente y precipitado. Al principio, se muestra temerario frente al mito del sabueso, pero hacia el final empieza a inquietarse por la leyenda. Al resolverse el caso, queda profundamente afectado por los sucesos en Baskerville.
Sir Charles Baskerville
Era el jefe de la finca de los Baskerville, y su muerte es la que inicia la investigación de Holmes y Watson. Era un hombre supersticioso y nervioso, que se encontraba atemorizado por la maldición de los Baskerville, hasta el punto de que esto afectara profundamente su salud. Era un hombre querido entre la población del páramo por su gran actividad filantrópica. Al morir, se vuelve imprescindible que un heredero lo reemplace para continuar con sus buenas obras en la región.
Sir Hugo Baskerville
Hugo Baskerville es un tenebroso antepasado de los Baskerville, que encarna los excesos aristocráticos y cuya maldad inspiró, supuestamente, la maldición del sabueso. Cuenta la leyenda que secuestró a una joven campesina, la cual escapó. Hugo salió en su búsqueda, siendo él a su vez perseguido por un sabueso demoníaco que lo asesinó, y que luego se dedicó a perseguir a sus descendientes.
Doctor James Mortimer
Era un amigo cercano de Charles y médico de los Baskerville en Devonshire. Es quien va en busca de Holmes para solicitar su ayuda y consejo sobre cómo proceder luego de la muerte de sir Charles. Es un hombre alto, delgado y de apariencia algo descuidada; pero agradable. Asimismo, es un hombre de ciencia, pero a falta de una explicación racional, acepta parcialmente la leyenda del sabueso.
Jack Stapleton (Rodger Baskerville)
Jack Stapleton es un naturalista entomólogo delgado y de aspecto excéntrico. Es el villano del misterio. Su nombre real es Rodger Baskerville y es sobrino de sir Charles. Jack tuvo que cambiar varias veces de identidad a causa de su pasado criminal. Nació en Sudamérica y se mudó al norte de Inglaterra, donde dirigió una escuela rural antes de dirigirse a Devonshire, con el objetivo de heredar la finca de los Baskerville. Es un villano manipulador y cruel, a quien Holmes y Watson llegan a temer.
Beryl Stapleton
Es la supuesta hermana de Stapleton, que hacia el final de la historia se revela como su esposa. Es cómplice de su marido por mucho tiempo, ya que se encontraba bajo su influencia, pero se muestra ansiosa por evitar otra muerte. Esto se ve en las advertencias que les hace a Watson y a sir Henry en las que les sugiere huir de los páramos ya que son peligrosos para ambos.
John Barrymore
Es el mayordomo de los Baskerville desde hace mucho tiempo, y es quien descubrió el cuerpo de sir Charles después de morir. Se presenta como uno de los principales sospechosos a causa de actitudes extrañas que tiene al comienzo de la historia, pero finalmente termina aportando datos cruciales para la investigación.
Eliza Barrymore
Es la esposa del señor Barrymore y hermana de Selden, y sirvió junto a su esposo a la familia Baskerville desde hace mucho tiempo. Los sonidos de llantos de la señora Barrymore despiertan sospechas en Watson cuando llega a Baskerville.
Selden
Es un asesino que se escapó de la cárcel de Princetown y vaga prófugo por el páramo. Es el hermano de la señora Barrymore. Tiene un aspecto demacrado, y su deseo es huir hacia Sudamérica. Mientras tanto, se esconde para ocultarse de sus captores, y su hermana y el señor Barrymore le proveen comida y vestimenta.
Laura Lyons
Es una joven mujer que vive en el poblado cercano de Coombe Tracey. Es la hermosa hija de Frankland, quien la repudió cuando se casó en contra de su voluntad. Por otra parte, Laura es infeliz en su matrimonio y mantiene una relación de amantes con Stapleton. Stapleton, por su parte, la manipula para que le pida dinero a sir Charles, con el fin de realizar un encuentro nocturno en el cual pueda soltar al sabueso.
Frankland
El padre de Laura y se muestra tacaño e indiferente con su hija. Frankland es un anciano que vive en el páramo y disfruta causando problemas legales a sus vecinos por motivos arbitrarios. Utiliza frecuentemente su telescopio para espiar a los demás.
Lestrade
Lestrade es un detective de la policía de Londres, que acude al páramo cuando Holmes cree que hay suficientes pruebas para detener a Jack Stapleton. Aparece con frecuencia en otras historias de Sherlock Holmes, y representa a la ley oficial.
Murphy
Murphy es un comerciante de caballos que vive en el páramo, y es el único testigo posible de la muerte de sir Charles. Estaba borracho en el momento del asesinato y solo puede declarar haber oído gritos.
Cartwright
Es el mandadero de Sherlock, quien le encarga diversas tareas para su investigación.