Martín Fierro
Es el protagonista y la voz principal del poema. Martín Fierro es un gaucho de la pampa argentina que se describe a sí mismo como un virtuoso cantor, valiente y despierto, hábil con el caballo y con el cuchillo. Lleva a cuestas las desgracias que ha padecido como si fueran un designo de su destino, determinado por haber nacido gaucho, pero también se muestra perspicaz al reconocer que sus males se deben a culpas ajenas. Su actitud desafiante se contrapone con la compasión que produce su canto.
Cruz
Cruz es el compañero de aventuras de Martín Fierro. Es un gaucho cantor, pero menos hábil que su amigo. Sabe, como aquel, manejar el cuchillo y enfrentar con coraje la adversidad. Antes de conocer a Fierro, Cruz también había tenido sus conflictos con la autoridad, pero los había resuelto convirtiéndose en sargento de policía. Cuando va al encuentro con Fierro para capturarlo, decide pasarse de bando y pelear junto a él. De esta manera, reivindica su destino matrero y su posición desafiante contra el poder.
El Juez de Paz
Es una de las figuras de autoridad con las que Fierro confronta en el poema. En el siglo XIX, los jueces de Paz eran funcionarios legos encargados de casos judiciales menores que, en algunos casos, podían ser electos por la comunidad local. El que aparece en el poema se había enojado con Fierro porque no había ido a votar en la última elección. Fierro cree que por este motivo lo envía a la frontera.
El Mayor
Otra de las figuras que detentan el poder en el poema. El mayor es quien le dice a Fierro que no le toca recibir pago por su servicio en la frontera, debido a que no se encuentra en la lista. También lo trata despectivamente al decirle "animal", y luego se venga de Fierro por haber pedido su sueldo enviándolo al estaquiadero.
El "viejo" comandante
Con este nombre llama Cruz a la figura de autoridad con la que se enfrenta a causa de su mujer. Lo trata despectivamente de viejo. El comandante lo enviaba a Cruz a hacer trabajos lejos de su rancho para estar con su china, hasta que Cruz los descubre y decide enfrentarlo. Este comandante es la razón por la cual Cruz pasa a tener una vida de matrero.
El hijo del cacique
Es uno de los indios contra los que lucha Fierro en la frontera. Fierro singulariza en su relato este enfrentamiento para dar relación de un combate mano a mano en el que el gaucho cantor muestra su destreza para pelear y vencer, terminando con la vida del otro, al que caracteriza como salvaje. El hecho de que sea el hijo de un cacique, dato que nos da Fierro en su poema, le sirve al cantor para reforzar el hecho de que logró eliminar a un rival de importancia.
El gringo
Martín Fierro llama "gringo" a uno de los personajes de la frontera, de procedencia “papolitana” (napolitana). Con él tiene un malentendido verbal, en el que Fierro se burla de su modo de hablar en castellano y el gringo, borracho, responde disparándole pero errando el tiro. Desde su xenofobia, Fierro caracteriza a todos los gringos como personas inútiles que no saben trabajar ni servir en la frontera.
El negro
Martín Fierro denomina por su color de piel a uno de los personajes que mata en un duelo a cuchillo. Fierro lo provoca al referirse despectivamente primero a su compañera, también de raza negra, y después a él, invitándolo así a pelear. Enfurecido, el negro arremete contra Fierro pero este, después de una ardua batalla, vence y termina con su vida. También sabemos que es una persona que sufre la discriminación porque, después de muerto, no consigue que nadie le dé sepultura cristiana.
El gaucho protegido
Es el otro personaje al que Fierro mata en un duelo a cuchillo. Sabemos que es un gaucho protegido por un comandante con el que tenía un arreglo. Fierro lo provoca verbalmente, también en búsqueda del enfrentamiento físico, y el otro responde aceptando el desafío. Con este combate Fierro está confrontando indirectamente con la autoridad, porque pelear con un gaucho protegido le puede traer más problemas que pelear contra el negro, de quien nadie se ocupa ni de enterrar. Por eso, cuando lo mata, Fierro debe huir para que no lo atrape la policía.
El guitarrero
Es el personaje al que Cruz acuchilla en una pulpería debido a que este se burló de él con unas coplas con las que se refería, entre líneas, a la infidelidad de su mujer.
