Otelo
Un noble moro al servicio del estado veneciano. Se enamora y se casa con la delicada Dédemona, aunque él es de mediana edad y ella es todavía joven. Otelo es un buen hombre, valiente y gran guerrero, pero es víctima de dos falencias: los celos y el orgullo. Aunque Otelo es muy elocuente, él cree que sus costumbres y sus palabras son toscas.
Desdémona
La esposa de Otelo, una joven veneciana de alta alcurnia y buena crianza. Desdémona es casi demasiado virtuosa, lo que la hace sentir que debe defender a Casio y hablar públicamente cuando es necesario. Es más fuerte de lo que Otelo cree, y no es la mujer privada, retraída y dócil que él desearía que ella fuera.
Casio
El teniente de Otelo, aunque tiene poca experiencia en el oficio. Casio es un noble veneciano que sabe cortejar a las mujeres. Se opone a Otelo en muchos aspectos, razón por la cual este lo admira y lo envidia. Otelo llega a creer que Casio ha tenido un amorío con su mujer, si bien las intenciones de Casio con Desdémona son del todo honorables.
Yago
Es el alférez de Otelo, a quien Casio le ha quitado el puesto de teniente. Yago es joven y traicionero; se muestra como un villano desde el principio y, aunque menciona su orgullo herido y la alegada infidelidad de su esposa Emilia con Otelo, sus acciones no tienen verdadera justificación. Es inmoral, pero muy perceptivo, entusiasta, y capaz de manipular a las personas para que caigan en sus trampas.
Emilia
Esposa de Yago y doncella de Desdémona. Se le confía llevar a la gente ante la presencia de Desdémona y quedarse con ella en todo momento. Emilia no es consciente de las maquinaciones de su marido, ni de sus cualidades más oscuras. Ella le sigue siendo fiel a Desdémona por encima de los demás, aunque sin darse cuenta cumple un papel clave en la traición de Yago.
Brabancio
Padre de Desdémona, senador y renombrado ciudadano de Venecia. No le agrada en absoluto la unión de Desdémona y Otelo, y le advierte a su yerno que así como su hija lo traicionó a él, Desdémona podría traicionar también a su marido.
Rodrigo
Un caballero veneciano que desea a Desdémona y que, por esto, es un peón en los planes de Yago. Este le promete a Rodrigo que él obtendrá el amor de Desdémona a cambio de su ayuda, pero Rodrigo no recibe más que una muerte deshonrada, después de atentar contra la vida de Casio.
Duque de Venecia
Gobernante de la ciudad y superior de Otelo. Él permite que Otelo y Desdémona permanezcan juntos, a pesar de las protestas de Brabancio. El Duque también envía a Otelo hacia Chipre para combatir a los turcos.
Senadores
Otras figuras de autoridad de Venecia, hombres de razón y orden que también apoyan la unión de Otelo y Desdémona. En asuntos de guerra, Otelo responde a ellos y al Duque.
Blanca
Cortesana amante de Casio que lo visita frecuentemente. Este le pide que haga una copia del pañuelo de Desdémona, y el hecho de que este pañuelo aparezca en su casa lo incrimina aún más del supuesto amorío. Es la única mujer de la obra a la que Casio muestra menos respeto, posiblemente porque Blanca es una prostituta.
Montano
Predecesor de Otelo en el gobierno de Chipre. En el final de la obra, pronuncia un juicio contra Yago, comenta la situación y asiste en la conclusión de la trama. Es la principal figura de orden y ley en Chipre, y sirve como control de daños luego de que Otelo muera y Yago se muestre poco apto para el cargo.
Ludovico y Graciano
Dos nobles venecianos, emparentados con Brabancio y Desdémona. Los dos personajes cumplen su papel más importante cuando Desdémona muere y deben llevar las noticias de la tragedia a Venecia, en su rol de funcionarios de la ciudad.